പോളിമർമാസ് ചെയിൻ റിയാക്ഷൻ (പിസിആർ), എസ്ടിഡി ടെസ്റ്റിംഗ്

PCR വിശകലനം എന്താണ്?

പോളിമർമാസ് ചെയിൻ റിവാക്ഷൻ (പിസിആർ) വിശകലനം എന്നത് ഒരു സാമ്പിളിൽ ചെറിയ അളവ് ഡിഎൻഎ തിരിച്ചറിയുന്നതിനുള്ള ഒരു ലബോറട്ടറി ടെക്നിക്കാണ്. പിസിആർ മെച്ചപ്പെടുത്തൽ സമയത്ത്, വിശകലനം ഡിഎൻഎ വിശകലനം കണ്ടെത്താനും അതു മതി വരെ അത് ആവർത്തിച്ചു. ഉദാഹരണമായി, മൂത്രാശയത്തിൽ ഉണ്ടാകുന്ന ഗൊണോറിയക്കും ക്ലമൈഡിയയ്ക്കും കാരണമാകുന്ന ജീവജാലങ്ങളിൽ നിന്ന് ചെറിയ അളവിൽ ഡിഎൻഎ കണ്ടെത്തി തിരിച്ചറിയാൻ PCR ഉപയോഗിക്കാം.

പിസിആർ എങ്ങനെ പ്രവർത്തിക്കും?

പിസിആറിലെ ആദ്യപടിയാണ് സാമ്പിളുണ്ടാക്കിയത്. ഇരട്ട കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ട ഡി.എൻ.എ രണ്ടു വിരലുകളായി വേർതിരിക്കപ്പെടുന്നു - ഇത് നാണക്കേട് എന്ന് വിളിക്കുന്നു. ഡിഎൻഎ ശ്രേണിയുടെ അവസാനം വരെ ഡിഎൻഎയുടെ പ്രാഥമിക മാതൃകകൾ, സാമ്പിൾ ഡിഎൻഎയുമായി ഒന്നിച്ചു ചേർക്കുന്നു. ഇതിനു ശേഷം ഡിഎൻഎ എന്ന പോളിമറേജ് ഡിഎൻഎയുടെ പ്രാരംഭ സ്ഥലത്ത് റീപ്ലേസർ ചെയ്യാൻ തുടങ്ങും. അവസാനമായി, ഡിഎൻഎ വീണ്ടും വഴുതി മാറാൻ ചൂടാക്കി, പിസിആറിന്റെ മുഴുവൻ പ്രക്രിയയും വീണ്ടും ആരംഭിക്കുന്നു.

ഓരോ പിസിആർ ചക്രത്തിലും ഓരോ മാതൃകയിലുള്ള താത്പര്യം ഡി.എൻ.എ. വിഭാഗത്തിന്റെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കും: ഒരു കോപ്പി രണ്ടായി മാറുന്നു, അപ്പോൾ നാലു് ആകുമ്പോൾ എട്ട് ആയിത്തീരുന്നു. സാധാരണയായി, 20 ഡിഗ്രി ക്ളക്കുകൾ മാത്രമേ ഡിഎൻഎയിൽ ഉണ്ടാവുകയുള്ളൂ എന്നും (അവ വിശകലനം ചെയ്യുന്നതിന് മതിയായ സാമ്പിൾ നൽകണമെങ്കിൽ) നിർണ്ണയിക്കാൻ ആവശ്യമാണ്.

പോളിമർമാസീസ് ചെയിൻ പ്രതികരണത്തിന്റെ എല്ലാ ഘട്ടങ്ങളും - ഡി.എൻ.എ., പ്രൈമർമാരുപയോഗിച്ച്, ഡിഎൻഎയെ അഴിച്ചുവിടുക - വ്യത്യസ്ത താപനിലകളിൽ സംഭവിക്കുന്നതാണ്, അതിനാൽ ആദ്യ മിശ്രിതം ഒന്നിച്ചു ചേർന്നതിനുശേഷം , നടപടികൾ തെർമോസിക്ലിംഗ് , ഓരോ ഘട്ടത്തിലും നടക്കാൻ ആവശ്യമായത്ര അളവിലുള്ള അളവിൽ താപനില നിലനിർത്തുന്നു.

അതിനാൽ, മനുഷ്യന്റെ ഇടപെടലിനു് ആവശ്യമില്ലാത്ത ഒരു ടെസ്റ്റ് ട്യൂബിൽ ടാർഗെറ്റ് ഡി.എൻ.എ യുടെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള ഫലപ്രദമായ മാർഗ്ഗമാണ് പിസിആർ.

പോളിമർസെസ് ചെയിൻ പ്രതികരണം 1980 കളുടെ ആദ്യം വികസിപ്പിച്ചപ്പോൾ ബയോളജിക്കൽ ടെക്നിക്സിന്റെ ഒരു വിപ്ലവത്തെ പ്രതിനിധാനം ചെയ്തു. പി.സി.ആർ. സ്രഷ്ടാവ് കരി മുല്ലീസ് 1993-ൽ തന്റെ രചനക്കു വേണ്ടിയുള്ള നോബൽ സമ്മാനം കരസ്ഥമാക്കി.

പി.സി.ആർ. എസ്ടിഡി ടെസ്റ്റിംഗിന് പ്രസക്തമായത് എന്തുകൊണ്ട്?

പോളിമർമാസ് ചെയിൻ പ്രതികരണം, ലിഗേയ്സ് ചെയിൻ റിപ്പക്ഷൻ പോലുള്ള അനുബന്ധ സാങ്കേതികവിദ്യകൾ എന്നിവ എസ്ടിഡി ടെസ്റ്റിംഗിനുള്ള പ്രാധാന്യം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. സാമ്പിളുകളിൽ ചെറിയ അളവിൽ വൈറൽ ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ആർഎൻഎ നേരിട്ട് ഈ ടെക്നിക്കുകൾ നേരിട്ട് തിരിച്ചറിയാൻ കഴിയും. ഒരു രോഗകാരന്റെ ജനിതക കോഡ് തിരിച്ചറിയുന്നത് രോഗകാരി ജീവനോടെ ജീവിക്കേണ്ടതില്ല - ബാക്ടീരിയൽ സംസ്കാരം അല്ലെങ്കിൽ വൈറൽ സംസ്കാരം . ഒരു അണുബാധയുള്ള ആന്റിബോഡി പ്രതിവിധി ( ELISA കണ്ടുപിടിച്ചതു പോലുള്ളവ) വികസിപ്പിച്ചതിന് വളരെക്കാലം മുമ്പുതന്നെ ഈ അണുബാധ ഉണ്ടാകണമെന്നില്ല. ഇതിനർത്ഥം, PCR ടെക്നിക്കുകൾ ചിലപ്പോൾ മറ്റ് ടെസ്റ്റുകളെക്കാൾ നേരത്തെ രോഗങ്ങൾ കണ്ടുപിടിക്കാൻ സാധിക്കും എന്നാണ്. സാമ്പിളുകൾ ജീവൻ നിലനിർത്തുന്നതിനോ കൃത്യസമയത്ത് കൃത്യമായി പരിശോധിക്കുന്നതിനോ ശ്രദ്ധിക്കേണ്ടതുണ്ട്.